期刊简介

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  • 杂志名称:中华骨科杂志
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中华医学会
  • 国际刊号:0253-2352
  • 国内刊号:12-1113/R
  • 出版周期:半月刊
期刊荣誉:期刊收录:哥白尼索引(波兰), 万方收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 剑桥科学文摘, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘杂志, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中华骨科杂志2006年第06期

AAV-hVEGF165及AAV-TGFβ1转染兔椎间盘纤维环细胞的实验研究

董跃福;胡有谷;王德春

关键词:血管内皮生长因子A, 转化生长因子β, 椎间盘, 胶原Ⅰ型
摘要:目的探讨应用hVEGF165与TGFβ1基因逆转椎间盘退变的可行性.方法用分子克隆技术,从pcDNA3(+)-hVEGF165获得hVEGF165cDNA,并克隆至AAV包装质粒pSNAV上,构建成pSNAV-hVEGF165的AAV重组质粒.经酶切及测序鉴定后,用脂质体介导pSNAV-hVEGF165转染HEK293细胞和血管内皮细胞.荧光免疫组化方法检测hVEGF165蛋白,并用MTT法测定hVEGF165对血管内皮细胞增殖的影响.由本元正阳公司对pSNAV-hVEGF165进行AAV-hVEGF165包装.AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1联合转染退变的椎间盘纤维环细胞,Western blot检测hVEGF165与TGFβ1的表达以及纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量的变化.结果经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-hVEGF165构建完成,荧光免疫组化显示hVEGF165蛋白表达,MTT法显示hVEGF165蛋白对血管内皮细胞增殖有促进作用.本元正阳公司包装出具有生物学功能的AAV-hVEGF165,AAV-hVEGF165构建成功.Western blot显示hVEGF165与TGFβ1在纤维环细胞中表达,AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1双基因联合转染的纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量较hVEGF165与TGFβ1基因各自单独转染的细胞Ⅰ型胶原表达量明显增多.结论hVEGF165在体外能够协同TGFβ1促进退变纤维环细胞Ⅰ型胶原表达增加.