期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办、天津医院承办。本刊创刊至今已有30年，始终是我国骨科领域最权威的学术期刊。30年来，我们始终以学术质量为根本，以促进骨科事业发展为己任，以造福人民为最终目标。目前，我刊已被国内外多家数据库收录，影响因子、被引频次、学术地位等持续领先。作为骨科学术交流平台，我们欢迎各种类型的稿件，请关注我们、信赖我们、支持我们、与我们一同进步。
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首页>中华骨科杂志
- 杂志名称：中华骨科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0253-2352
- 国内刊号：12-1113/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：期刊收录：哥白尼索引(波兰), 万方收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 剑桥科学文摘, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘杂志, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
pELNS-BMPs与pELNS-Wnt3a联合构建表达对成骨细胞系成骨效能的作用研究
阮文东；雪原；宗亚琪；孙超
关键词：骨再生, 骨形态发生蛋白质类, 质子载体, 成骨细胞
摘要：目的 构建第三代自体失活的骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2、4、6、7、9和Wnt3a慢病毒表达载体,并整合入小鼠间质干细胞MC3T3-E1的基因组中,构建成骨诱导因子基因修饰的小鼠间质干细胞,探讨各成骨诱导因子的成骨分化能力及通过双基因联合转染提高成骨分化能力的有效性.方法 以cDNA文库为模板,构建BMP-2、4、6、7、9及Wnt3a基因表达质粒载体,酶切鉴定重组体且经测序进一步确定后,与pLP/VSVG、pLP1、pLP2质粒共转染293FT细胞.包装pELNS-BMP-2、4、6、7、9及Wnt3a后转染小鼠间质干细胞MC3T3-E1细胞,GFP荧光证实转染效果.Realtime PCR检测Runx2 mRNA的表达水平,鉴定各成骨诱导因子的单独转染效能.双基因联合转染(共8组)MC3T3-E1细胞,GFP荧光证实转染效果;应用ELISA检测MC3T3-E1细胞培养上清中骨钙素(bone gla protein,BGP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达水平;应用Real time PCR检测Runx2 mRNA的表达水平;应用Western blot检测BMP-2、4、6、7、9及Wnt3a蛋白的表达水平,鉴定双基因联合转染的成骨分化效能.结果 重组慢病毒pELNS-BMP-2、4、6、7、9及pELNS-Wnt3a构建成功,成功转染MC3T3-E1细胞;Runx2 mRNA表达水平:BMP-2＞ BMP4-＞ BMP-9＞ BMP-7＞ Wnt3a＞ BMP-6.双基因(共8组)联合转染MC3T3-E1细胞,GFP荧光证实转染成功;Runx2 mRNA表达水平、BGP和ALP表达水平结果显不,BMP-2与BMP-7共转染成骨效率高,Western blot证实BMP-2和BMP-7联合转染MC3T3-E1细胞后BMP-2、4、6、7、9及Wnt3a蛋白表达升高.结论 成功构建第三代慢病毒载体pELNS可将BMP-2、4、6、7、9和Wnt3a导入小鼠间质干细胞MC3T3-E1,使其有效表达;各成骨诱导因子能促进MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化,BMP-2和BMP-7双基因联合转染能有效提高成骨转化.
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