期刊简介

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  • 杂志名称:中华骨科杂志
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中华医学会
  • 国际刊号:0253-2352
  • 国内刊号:12-1113/R
  • 出版周期:半月刊
期刊荣誉:期刊收录:哥白尼索引(波兰), 万方收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 剑桥科学文摘, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘杂志, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
中华骨科杂志2017年第14期

椎间盘退变中asporin的作用机制研究

吴成爱;江晓舟;郑山;王娜;王莹;姜旭;田伟

关键词:椎间盘, 转化生长因子β1, 细胞外基质, 信号传导
摘要:目的 探讨asporin在椎间盘基质合成和分泌中的分子调控机理,明确其在椎间盘退行性病变中的作用.方法 取因严重椎间盘突出症(有典型临床症状、体征及Pfirrmann'sⅢ级以上)入院行椎间融合术患者的椎间盘组织标本共8例,其中男6例,女2例,年龄11~28岁,平均(20.25±3.37)岁.利用酶消化法提取椎间盘组织中的原代细胞,在藻酸盐珠中悬浮培养2周后播种于培养皿中.细胞予以不同浓度TGF-β1刺激6、12、18和24h,提取细胞RNA后行实时荧光定量PCR,检测asporin的mRNA表达;细胞经siRNA沉默内源性asporin表达后,以TGF-β1刺激细胞24 h,提取细胞RNA行实时荧光定量PCR,检测asporin、Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的mRNA表达;细胞经特异性p38抑制剂或ERK抑制剂处理12h后,以TGF-β1刺激细胞24 h,提取细胞蛋白质后行蛋白印迹实验,检测asporin蛋白水平.结果 在原代椎间盘细胞实验中,TGF-β1诱导下asporin表达水平显著增高,TGF-β1呈现剂量与时间正依赖关系,刺激24 h后不同浓度(5,10,15 ng/ml)之间有显著差异,分别为2.754±0.24、3.651±0.319和4.583±0.38 (F=24.782,P=0.001).经敲除内源性asporin表达后,TGF-β1诱导合成的基质蛋白,即蛋白聚糖(t=7.387,P=0.002)和Ⅱ型胶原蛋白(t=4.443,P=0.0 11)显著增加.利用特异性p38抑制剂阻断p38磷酸化后,TGF-β1对asporin的诱导作用明显地被抑制.结论 在椎间盘细胞中asporin与TGF-β1呈现功能反馈环:TGF-β1上调asporin表达,而asporin通过负反馈抑制TGF-β1信号传导通路,进而抑制TGF-β介导的细胞外基质的合成;在椎间盘细胞中TGF-β1通过p38途径上调asporin表达.